Post by jone447 on Aug 2, 2023 0:54:32 GMT -6
加溶液并混合管。将样品全速离心 3 分钟，新管中，避免水相污染。再次旋转样品，将上层相转移至新管中并在通风橱下蒸发过夜。将脂质溶解在 1 ml Triton X-100:甲醇:丁醇 (1:1:3) 混合物中，并对 TC 和 TG 水平进行定量。 血浆分离 通过将 400 μL 合并血浆加载到样品环中，通过 FPLC 分离合并血浆中的脂蛋白。加载样品后，使用两个串联 Superose-6 FPLC 柱 (HR10/30)
在 FPLC 缓冲液（0.15 M NaCl、0.01 M Na 2 HPO 4 、0.1 m亚洲手机号码列表M EDTA，pH 7.5）中分离 0.5 mL级分。 0.4 毫升/分钟。使用高分子量和低分子量标准品（GE Healthcare）校准柱。 蛋白质印迹分析 将细胞和组织与 3 体积的 RIPA 裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8、150 mM NaCl、1% NP40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS 和 1 片 cOmplete TM 不含 E
DTA 的蛋白酶抑制剂混合物（Roche））均质化（使用 Tissue Lyser II，Qiagen），在冰上孵育 30 分钟，然后离心 1 16,000 × g下5分钟和 4°C。使用BCA测定法(Sigma-Aldrich)测定蛋白质浓度。将等量的蛋白质在 Laemmli 缓冲液（1.7% SDS、5% 甘油、0.002% 溴酚蓝、60 mM Tris-HCl、pH 6.8、100 mM DTT）中于 95 °C 煮沸